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激光共聚焦显微镜使用步骤
2020-11-19 13:58:13


       与传统的显微镜相比,激光共聚焦显微镜具有更多的特性,它的分辨率、灵敏度和放大倍率都是传统显微镜的超多倍,因此激光共聚焦显微镜的操作方法也就比传统的显微镜更加的复杂,目前激光共聚焦显微镜已成为形态学,分子细胞生物学,神经科学,药理学和遗传学领域的新一代强大的研究工具。那么激光共聚焦显微镜具体的操作方法是什么呢?下面小编就将详细为大家介绍一下激光共聚焦显微镜的操作步骤。详情如下:

激光共聚焦显微镜使用步骤:

⒈根据荧光探针的激发和发射波长选择合适的激光,激光功率,光谱滤光片和发射滤光片。

⒉确定扫描方法:点,线,面,3D扫描。

⒊确定扫描密度(分辨率):256×256,512×512,1024×1024,2048×2048,分辨率越高,扫描速度越慢,图像信噪比越好,但越多可能会发生光漂白。

⒋选择激光共聚焦显微镜物镜的倍数和电子放大倍率:应尽可能选择具有高数值孔径的物镜。确定此条件后,确定扫描范围,物镜的透光率与数值孔径(NA)的四次方成正比,并且物镜放大倍数的平方。

⒌根据样品的制备质量,选择合适的针孔尺寸,调节激光管电压,光电倍增管功率,降噪等,这些参数的选择或设置非常紧密,应该全面考虑,这样才能达到最佳状态。

⒍确定光线切割范围,即扫描样品的厚度,起始位置和结束位置。

⒎给出了由光切割的层数和拍摄时的累积平均次数。最终我们可以获取图像并保存。

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