⒉确定扫描方法:点,线,面,3D扫描。
⒊确定扫描密度(分辨率):256×256,512×512,1024×1024,2048×2048,分辨率越高,扫描速度越慢,图像信噪比越好,但越多可能会发生光漂白。
⒋选择激光共聚焦显微镜物镜的倍数和电子放大倍率:应尽可能选择具有高数值孔径的物镜。确定此条件后,确定扫描范围,物镜的透光率与数值孔径(NA)的四次方成正比,并且物镜放大倍数的平方。
⒌根据样品的制备质量,选择合适的针孔尺寸,调节激光管电压,光电倍增管功率,降噪等,这些参数的选择或设置非常紧密,应该全面考虑,这样才能达到最佳状态。
⒍确定光线切割范围,即扫描样品的厚度,起始位置和结束位置。
⒎给出了由光切割的层数和拍摄时的累积平均次数。最终我们可以获取图像并保存。